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牛血清白蛋白BSA的前世今生
日期:2015年06月18日 信息来源:深圳市纽邦生物科技点击率:3691

       牛血清白蛋白Albumin from bovine serum,BSA,是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量66-68kD,等电点4.8,含氮量16%,含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用,贡献80%的渗透压、PH缓冲作用、营养作用,载体作用,可以携带众多的物质进行循环,包括脂肪酸,金属离子,胆红素,激素和药物。

 



1 .BSA分子模式图



牛血清白蛋白Albumin from bovine serum,BSA,又称为 组分V,或Cohn V,名称起源于BSA最早的分馏法Cohn 冷乙醇法,Cohn法仍然是目前非常普遍的BSA分馏法,除了了冷乙醇法,目前最主要的还有热休克法和色谱层析法。

 



2. 几种常见的BSA分馏法


一、 Cohn 冷乙醇法

Cohn 冷乙醇法最早是由哈佛大学Edwin Cohn教授于1946年发明的,基于战争创伤治疗对注射级别的蛋白的大规模需求,Cohn教授在较低的温度下改变血浆的乙醇浓度和PH值,使其所含蛋白在不同的乙醇浓度下析出,在第五个析出的组分中主要成分即为BSA,所以BSA又称组分VCohn V

 



3. Cohn 冷乙醇法条件


Cohn 法是最早的BSA分馏法,为后续的BSA分馏提供了重要的思路,但是Cohn法过程中血浆蛋白涉及乙醇和低PH酸变性,以及多种杂蛋白干扰,所以分馏的BSA的质量上差强人意,相比其他更先进的分馏法,存在许多问题:

BSA蛋白变性,片段化,活性低;

BSA纯度较低,杂质含量高;

BSA产量低;

适用一般实验,很难用于细胞培养。

二、    热休克法

Cohn 法为大规模生产BSA提供了思路,但是因为涉及临床使用,生产的BSA需要进行肝炎病毒灭活,血浆在9%乙醇和PH6.5的时候加热至68度;热休克法一般需要添加辛酸最大程度维持BSA不被变性。

 





4. 热休克法流程


热休克法生产的BSA产量最高,纯度也高,逐渐取代Cohn法成为BSA分馏主要方法,但是热休克法BSA也有一些缺陷:

BSA蛋白高温变性,活性低;

辛酸对细胞有损伤,不适合细胞培养;

纯度低,加热会产生很多变性BSA多聚体和一些片段化BSA,同时也会产生很多其他变性蛋白。

三、    色谱层析法

色谱层析法Chromatographic法是目前BSA生产最为先进的方法,也是最为温和的方法;起于生产人血清白蛋白用于临床治疗,主要包括三个步骤,超滤,离子交换色谱层析和硫酸铵沉淀;整个过程,无加热,无乙醇,无辛酸,最温和的方法,最大程度保护BSA自然结构和功能,生产的BSA结构完整单体,绝不变性,活力最强,纯度最高,无杂质,最适合细胞培养,MP位于世界上最为纯净的血源地-新西兰,生产BSA超过15年历史,用于胚胎移植,大批量生产BSA

 



5. MP Bio色谱层析法生产BSA流程



6. MP Bio色谱层析柱

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