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哮喘以及其他过敏性疾病的免疫诊断
日期:2015年02月03日 信息来源:深圳市纽邦生物科技点击率:4138

       INDOOR Biotechnologies Inc.(INDOOR)公司是一家专业开发生产用于研究哮喘以及其他过敏性疾病的免疫诊断和相关生物学检测产品的生物技术公司。公司在过敏原环境暴露水平的评估方面为世界领先。对过敏原结构,分子生物学和免疫反应的研究,公司处于世界前列。INDOOR公司致力于环境科学,过敏和哮喘相关的专业产品与服务,以供研究人员和消费者使用,通过研究、培训和开发尖端科技,为我们的客户和全球客户服务,以改善病人护理。INDOOR为政府及学术研究人员,全球500强的企业,室内空气质量的企业、过敏疫苗生产商和生物制药企业提供服务。

       INDOOR生产的一系列过敏原研究和检测用抗体拥有来自美国弗吉尼亚大学的独家专利,覆盖范围广,包括屋尘螨、猫、狗、蟑螂、真菌和食物过敏原。这些抗体是包括ELISA和MARIA™ 技术在内的过敏原检测和我们的Ventia™ 快速过敏原检测实验分析平台的核心组分。IB的过敏原检测范围非常广泛,可用于对过敏原环境暴露水平的评估,也能让用户对使用的过敏原隔离清除程序、相关产品和设备的有效性进行可靠的评估,还可应用于过敏原标准化以及相关产品的研究开发。

       INDOOR 还开发出了天然和重组的过敏原产品线,可用于研究和开发过敏原诊断产品和疫苗。这个产品线目前涵盖50多种纯化的过敏原,具有很高纯度和生物活性。这个产品线还包括低内毒素的纯化LoTox™过敏原,可用于过敏原和哮喘的免疫研究。

       INDOOR的技术和产品已经在全球范围内被广泛使用,相关的科学论文已在超过250种科学出版物上发表。除提供产品以外IB还提供过敏原分析服务、合同研究服务以及专业培训服务。


Indoor Biotechnologies研发出一种针对Indoor过敏原(MARIATM)的多重芯片,可以在一次检测中同时测试8个最重要的Indoor过敏原。芯片同时检测Der p 1Der f 1 Mite Group 2 Fel d 1 Can f 1 Rat n 1 Mus m 1 Bla g 2MARIATM可以提升高通量系统的实验分析能力(灵敏度,精确度和精密度增加),并可以节省时间和成本。
        MARIATM技术与Radix BiosolutionsLuminex Corporation合作研发,并受到小企业创新研究所(SBIR)从国家环境健康科学研究(NIEHS)所得到的合同支持。结合了Indoor对过敏原特异的单抗生物技术产权与LuminexxMAP技术的力量,表现了过敏原检测的工艺水平。
        MARIATM的性能与实验室内部的重复性已经在国际多通道研究,包括来自美国和欧洲的9个实验室中被证实了。研究对比了32,000个过敏原的检查结果,表明MARIA在不同实验室的重复性都很好。近期的Indoor的数据发表在EAACI 2010上,在一个ISO17025依从的分析实验室检测结果表明MARIA的结果具有可重复性

本篇推荐Premixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5)


MARIATM    Premixed Multiplex Array for Indoor Allergens (5-Plex)


Product Code: MRA-P5    


    MRA-P5 试剂盒可以分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1Can f 1。这是一个多通量分析试剂盒,由INDOOR Biotechnologies生产。可以同时定量测定5个常见的Indoor过敏原:房屋灰尘螨Der p1(屋尘螨)、Der f 1(粉尘螨)、螨2型、动物过敏原Feld 1(猫、猫属)和Can f 1(狗、狗属)。

 


1. 预期用途 INTENDED USE 
       这是由INDOOR Biotechnologies Inc.生产的一个多重分析实验试剂盒,可用于同时定量检测5indoor过敏原:房屋灰尘螨过敏原Der p 1(屋尘螨属)、Der f 1(粉尘螨)、螨族2、动物过敏原Fel d 1(猫、猫属家猫)和Can f 1(狗、犬属家犬)。
        此试剂盒可能可用于分析环境中上述indoor过敏原样品,如房屋灰尘提取物,或空气过滤器样本,和其他生物学或环境样品。
2. 提供的试剂 REAGENTS SUPPLIED 

1(蓝盖)75 μL

货号: MS-P5

5种预混合的包被荧光标记抗体的微球

2 (黄盖) 50 μL

货号: ST-UAS

通用过敏原标准品

3 (棕盖) 100 μL

货号: BI-MRA-P5


预混合的生物素化检测单克隆抗体(mAb

4 (粉盖) 50 μL

货号: SAP-MRA

链霉素-藻红蛋白

5&6 (紫盖) 50 μL

货号: QC-MRA

质量控制样品: /

微孔滤板

货号: FP-MRA

Millipore MultiScreen BV

Millipore货号# MABVN1250


3. 实验流程 



预估需要时间:
样品准备:1小时;孵育:2.5小时; 读板: 1小时


 
4. 分析报告 

微球: 5种预混合的包被荧光标记抗体的微球

货号: MS-P5

特异性:针对Der p 1Der f 1、螨族2Fel d 1 Can f 1的单抗

下表中的微球在提供的瓶1中预混合:



Lot Number: xxxxx 
过敏原标准品:通用过敏原标准品
货号: ST-UAS
组成:8个纯化的天然过敏原组成,保存在1% BSA/50% glycerol/PBS, pH 7.4
浓度/校准:

Lot Number: xxxxx 
Analyte Bead Region mAb


(4). 分析证书 ( 继续 ) 
检测抗体:5种预混合的生物素化的检测单抗
货号: BI-MRA-P5
生物素化:EZ-链接Sulfo-NHS-LC生物素化
试剂用于实验滴定分析,溶于1% BSA/50%,甘油/PBS, 0.22μm 过滤,无防腐剂。

试剂盒提供下列生物素化mAb


Lot Number: xxxxx 
质量控制样本:/
货号: QC-MRA
组成:由高/低阳性对照组成
溶于PBS-T 0.02%, 1% BSA, pH 7.4
浓度/校准:

Lot Number: xxxxx, xxxxx 

5. MARIA 操作方法 

1. 将需要检测的灰尘样本解冻。

2. 在微孔板的96个孔内用100 μL实验缓冲液(过滤灭菌的1% BSA-PBS-0.02% 吐温20, pH 7.4).预湿板。

* 注意 :  96 孔板打入液体时,将枪头放于孔底部拐角处再打入。这将有助于确认枪头没有刺破过滤膜 

准备微球溶液

3. 涡旋5种微球混合物(货号:MS-P51分钟,然后取75 μL of微球混合物加到5.5ml实验缓冲液中,涡旋混匀

微球的分配如下所示:


准备标准品:

4.通过倍比稀释通用过敏原标准品(货号:ST-UAS)制作标准曲线。从1/20稀释开始: 吸取15 μl过敏原标准品至管1中的285 μl实验缓冲液,混合均匀。从管1中转移150ul至管2,持续这样操作直至形成12个梯度稀释。

* 注意 : 为了保证精确性,使用之前和稀释时将含有甘油的试剂彻底混匀是很重要的 *  
标准曲线稀释浓度范围为::

对于Der p 1, Der f 1, Can f 1为:125-0.06 ng/mL.

对于螨族2Fel d 1为:50-0.02 ng/mL

样品的准备
5. 涡旋样品剧烈震荡30s,然后14,000 rpm16,000 x g)离心2min,我们推荐在实验缓冲液中进行下列稀释。

质控样品(货号: QC-MRA) (可选): 不稀释

房屋灰尘提取物:1/10, 1/100 1/10,000

空气过滤器提取物: 不稀释, 1/5 1/20.

5. MARIA 操作方法 ( 继续 ) 

6.通过真空过滤器去除96孔板中的缓冲液。在纸上拍板去除板底部的剩余缓冲液。重复真空过滤。在纸上再次拍板。* 不要反转板子实验.

7.将微球溶液倒入一个移液槽中,用多通道移液器吸取后给每孔中加入50微球溶液。

倍比稀释标准品的孔中加入50 μL稀释的标准品。of diluted standard to duplicate standard wells.

在适当的孔中加入50 μL样品稀释液。

在空白孔中加入50 μL实验缓冲液

将多通道移液器调至50 μL并将每个孔剧烈混匀(重复5-10次)*

* 注意 : 混合时可能会产生气泡  室温黑暗条件下孵育1小时。

8.稀释生物素化的检测单克隆抗体混合物(货号: BI-MRA-P5)储存液,加入100 μL12 mL实验缓冲液。

通过真空过滤器去除样品和标准品,并用100μL实验缓冲液洗滤孔两次。

每个孔中加入100 μL 5种预混合的生物素化的检测单抗,剧烈吹打混匀。

室温黑暗条件下孵育1小时。

* 注意: 通过加 100 μL 实验缓冲液洗滤孔,然后通过真空过滤器去除缓冲液。不需要混合。 

9.50 μL12mL稀释链霉素-藻红蛋白(货号: SAP-MRA)

通过真空过滤器去除生物素化的抗体,用100 μL实验缓冲液洗滤孔两次。加入100 μL稀释过的链霉素-藻红蛋白,剧烈吹打混匀。  

室温黑暗条件下孵育30min*

* 孵育时间中,按照机器说明书准备读板的仪器。 

10.用真空过滤器去除链霉素-藻红蛋白溶液,用100 μL实验缓冲液洗滤孔两次。所有孔中加入100 μL 实验缓冲液,通过反复吹打重悬微球,注意不要产生气泡。
11.用手纸擦滤板的底部,在xMAP仪器中读板。


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