流式细胞术中细胞培养和刺激的基本方法

细胞活化的最终结果是产生细胞因子，根据检测指标和标本的不同，研究人员需要选择不同的刺激剂和刺激时间，以获得最佳的实验结果。下表提供了检测一些常用细胞因子的推荐的活化方法。

表1、细胞内细胞因子流式检测推荐的阳性对照活化方法

为防止细胞内细胞因子分泌到胞外，在培养的最后4-6个小时，需要使用蛋白转运抑制剂 (如3uM monensin，10mg/ml的BFA)。

方法1:  只使用转染细胞检测。

方法2: 人的PBMCs使用PMA (10 ng/ml) 和Ionomycin (1 uM) 刺激4-24 小时。

方法3: 人的PBMC 使用LPS (0.5 - 1 ug/ml) 刺激24 小时。

方法4: 人的PBMCs或者纯化的CD4＋细胞在包被人CD3抗体的培养板中，使用含有10 ng/ml重组人的IL-2（peprotech，目录号200-02）和10 ng/ml 的IL-4（peprotech，目录号200-04）的培养基培养两天； 细胞洗涤后在含有重组人IL-2和IL-4的培养基中继续培养2天； 最后收获细胞，使用PMA (10 ng/ml) 和Ionomycin (1 uM)刺激6小时。

方法5: CD4+ T 细胞使用PHA (10 ng/ml) 刺激4 天。

方法6: T 细胞使用抗CD3 的单抗、抗CD28的单抗和重组人的IL-1b (Lorre, et al., 1994, Clin Immuno Immunopath 70:1)。

方法7: 使用PMA (50 ng/ml) 和Ionomycin (500 ng/ml)刺激。

方法8: PBMCs细胞使用10 ng/ml重组人IFN-γ(peprotech，目录号300-02) 刺激2 小时，然后使用IFN-γ(10 ng/ml) + LPS (1 ug/ml) 刺激22小时或者使用相同的方法刺激THP-1 细胞。

方法9: EL4 在包被抗小鼠CD3抗体(25 ug/ml) 的培养板中，使用抗CD28 抗体(2 ug/ml) + PMA (5 ng/ml) + Ionomycin (500 ng/ml) 刺激6小时。

方法10: CD4＋T细胞在包被小鼠CD3(25 ug/ ml)抗体的培养板中，使用含有抗小鼠的CD28(2 ug/ml)的抗体，10 ng/ml的重组小鼠IL-2 （peprotech，目录号212-12） 和50 ng/ml 的重组小鼠IL-4 （peprotech，目录号212-14）的培养基培养两天；然后在含有重组小鼠IL-2和IL-4的培养基中继续培养3天；最后收获细胞，使用PMA(5 ng/ml)、Ionomycin(500 ng/ml)和monensin刺激6小时。

方法11: 小鼠巨噬细胞使用1 ug/ml LPS 刺激24小时。

方法12: 小鼠脾细胞使用PMA (5 ng/ml)和Ionomycin (500 ng/ml)刺激6小时。